兔ELISA試劑盒實驗的原理似乎很簡單,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,間中夾雜著洗滌和封閉。然而,即使是平淡無奇的洗滌和封閉,如果做得不太好,也有可能毀了整個實驗。在實驗結束時,是否能獲得有意義的信息,這在很大程度上取決于結果的信噪比,背景噪音會影響您對結果的判斷。
那么如何減少兔ELISA試劑盒在試驗中的誤差呢?
1、評估試劑的實用性,試劑的安穩與否,對精確率的凹凸到頭重要。在試劑啟用前,應進行陰、陽對照及樣品重復對比試驗,判定試劑符合要求后方可運用。
2、操作前仔細閱讀說明書,嚴厲依照說明書要求進行規范化操作。不同批號的試劑不行混用。值得改善的地方,重復試驗確認建立后才能改善,比方洗板次數的把握等。
3、加樣要精確、快速。加樣不精確,酶生成物的量不能確認,直接影響顯色成果。別的,顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關,所以加樣應慎重。要求在必定時刻內加樣結束的試驗,如果加樣緩慢,便出現差錯,并且試劑長期露出在外,尤其室溫過高時,保存期會縮短乃至失效。
4、檢驗技師應具備從事試驗室操作的基本素質和實踐經驗。能嫻熟操作試驗儀器、器械,具有必定總結和剖析問題的才能,對試驗中出現的意外狀況能及時妥善解決。
5、運用校對過的微量移液器,排除天然差錯。移液器精確與否對定量檢測尤為重要。
6、嚴厲把握顯色時刻,顯色時刻過短,加入終止液反應終止后,底物結合物的量過少,易出現假陰性。超越顯色要求時刻后顯色,應判為假陽性,這或許與試劑本身有關。加顯色劑后當即顯色,不行報陽性,這或許是本底顯色的成果。
7、洗刷*,洗板不*,酶結合物本底顯色會出現假陽性。別的,洗刷液要新鮮,現用現配,陳舊的洗刷液會出現本底增高現象,也或許出現假陽性。
8、嚴控反應時刻。反應時刻過長,酶失活;反應時刻過短,酶結合物不能與血清中的微生物抗原抗體充沛結合,生成物結構松散不牢固,容易洗掉,都或許形成假陰性。