簡述RNA提取試劑盒的正確操作步驟

　　RNA提取試劑盒采用裂解液，只需將樣品與裂解液A和B混合，經一步掛柱和洗脫即可快速可靠從組織、細胞、抗凝全血、病毒液樣本中純化出高純度的總RNA。

 

　　下面咱們來聊一聊RNA提取試劑盒的操作步驟：

 

　　1、樣品處理

 

　?。?）植物組織：取新鮮或-70℃凍存100mg組織在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混勻。

 

　?。?）動物組織：取新鮮或-70℃凍存100mg組織加1ml裂解液，用組織研磨杵或勻漿器勻漿處理。

 

　?。?）貼壁細胞：直接在培養板中加入裂解液裂解細胞，每106細胞加1ml裂解液。用取樣器吹打混勻。

 

　?。?）細胞懸液：離心收集細胞。每106動物、植物和酵母細胞或每107細菌細胞加1ml裂解液混勻。

 

　?。?）血液處理：取0.2-1ml新鮮血液加3倍體積紅細胞裂解液，混勻后室溫放置10分鐘，10000rpm離心1分鐘。棄上清，若沉淀含有紅細胞，可加入2倍體積紅細胞裂解液重復裂解步驟。離心后沉淀加入1ml裂解液混勻。

 

　　2、將處理后的樣品在室溫放置5分鐘，使得核酸蛋白復合物*分離。向勻漿樣品中加0.2ml氯仿，蓋好管蓋，劇烈振蕩15秒，室溫放置3-5分鐘。

 

　　3、2-8℃12000rpm離心10分鐘。RNA主要在上層無色的水相中，把水相轉移到新管中，不要吸到沉淀。

 

　　4、吸附柱前處理：在吸附柱中加入500ul洗柱液，室溫放置2分鐘，2-812,000rpm℃離心2min，棄廢液。

 

　　5、第3步收集的上清中加入200ul無水乙醇混勻，加入吸附柱靜置2分鐘，2-812000rpm℃離心2min，棄廢液。

 

　　6、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，2-812,000rpm℃離心2min，棄廢液。

 

　　7、向吸附柱中加入600ul漂洗液，2-812,000rpm℃離心2min，棄廢液。

 

　　8、12000rpm離心2min，棄掉收集管，將吸附柱置于室溫放置數分鐘將吸附柱中殘余的漂洗液去除。

 

　　9、將吸附柱放入新管中，向膜中央滴加50-100ulRNasefreeddH2O，室溫放置5min，12000rpm室溫離心2min

 

　　10、即得到RNA。