免疫球蛋白elisa試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應,即加標本和加酶結合物后。保溫的方式除有的elisa儀器附有特制的電熱塊外,一般均采用水浴,可將elisa板置于水浴箱中,elisa板底應貼著水面,使溫度迅速平衡。為避免蒸發,板上應加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,此時可讓反應板漂浮在水面上。
今天咱們來了解下免疫球蛋白elisa試劑盒的具體操作方法:
1、洗滌液:用前配制,有的試劑盒會標明,配好的4度下一般可以放一個月,如果沒有標明,盡量用新鮮的,不要多配制。
2、顯色液(有A液和B液的),用前15分鐘配制。
3、標準品:有的試劑盒中標準品是已經配制好的,4度保存,有的是要現配制的,按照說明書操作。
4、濃縮生物素結合的二抗和HRP:如果需要配制,試劑盒沒注明配好可以保存多久的話,盡量現配現用(用前15分鐘配制);原則是試劑盒上沒有指出配制物的儲藏方式的話,應該現配現用;不要怕麻煩;還有小瓶的管子開蓋前要離心,以免蓋子上粘連以后總量不夠。
5、加樣:室溫溫育的試劑,特別是溫育時間比較短的實驗操作的試劑,加樣對數據的影響比較大,特別要注意加樣問題。
含雜質較多的抗原也可選用捕獲包被法,試驗的特異性、敏感性均由此得以改善,重復性亦佳。蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附聯絡的,靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的效果于??蓪⒕郾揭蚁┌逑冉涀贤饩€照射(例如30W紫外燈,75cm照射12小時),以增加其吸附功能。