免疫球蛋白elisa試劑盒是以免疫學反應為基礎,將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。以靈敏度較高、特異性較好的特點在科研上得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。
由于抗原、抗體的反應在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應物,從而保證試驗結果的特異性與穩定性。應用雙抗體夾心法測定標本水平。用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入,再與HRP標記的抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。
下面要為您介紹的是免疫球蛋白elisa試劑盒的具體操作方法:
1、洗滌液:用前配制,有的試劑盒會標明,配好的4度下一般可以放一個月,如果沒有標明,盡量用新鮮的,不要多配制。
2、顯色液(有A液和B液的),用前15分鐘配制。
3、標準品:有的試劑盒中標準品是已經配制好的,4度保存,有的是要現配制的,按照說明書操作;
4、濃縮生物素結合的二抗和HRP:如果需要配制,試劑盒沒注明配好可以保存多久的話,盡量現配現用(用前15分鐘配制);原則是試劑盒上沒有指出配制物的儲藏方式的話,應該現配現用;不要怕麻煩;還有小瓶的管子開蓋前要離心,以免蓋子上粘連以后總量不夠。
5、加樣:室溫溫育的試劑,特別是溫育時間比較短的實驗操作的試劑,加樣對數據的影響比較大,特別要注意加樣問題。